阿帕鲁胺与自噬抑制剂合用可改善前列腺癌细胞的治疗效果

强调

•自噬代表了对新药阿帕鲁胺的重要抵抗机制。

•自噬的阻断显着损害了体外前列腺癌细胞的存活。

•自噬抑制剂与阿帕鲁胺的组合对LNCaP细胞具有明显的抑制作用。

背景

          ARN-509（阿帕鲁胺）是一种独特的雄激素受体（AR）拮抗剂，用于治疗去势抵抗性（CR）前列腺癌（PC）。它抑制AR核易位，DNA结合和AR基因靶标的转录。由于已在PC中检测到自噬失调，因此靶向自噬是克服早期治疗耐药性的一种潜在方法。因此，我们研究了对ARN-509治疗的自噬反应的特征，并评估了与自噬抑制相结合的潜在作用。

方法

           在不含类固醇的培养基中培养人前列腺癌细胞（LNCaP）。分别用ARN-509（50 µM）或与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3MA，5 mM）或氯喹（Chl，20 µM）或ATG5 siRNA组合处理细胞。通过流式细胞术和荧光显微镜法测量细胞活力和凋亡。通过免疫组织化学，AUTOdot和免疫印迹（WES）监测自噬。

结果

           到第7天，使用ARN-509进行处理可导致细胞死亡，在50 µM时高达37％，在100 µM时高达60％。在第7天，将50 µM ARN-509与自噬抑制剂结合使用可导致细胞死亡进一步增加。结果表明ARN-509诱导LNCaP细胞自噬，这可以通过ATG5，Beclin 1和LC3标点的升高以及WES检测到的LC3-II条带的增加来证明。通过用Chl处理细胞恢复自噬通量，从而增强LC3-II谱带。通过Autodot染色观察到的增强的自噬标点进一步支持了这些发现。

结论

          这些数据表明，用ARN-509处理会导致LNCaP细胞中的自噬水平提高。此外，与自噬抑制剂联合使用时，ARN-509具有显着提高的抗肿瘤作用，从而提供了可能对患者具有潜在意义的新治疗方法。