曲美替尼改善了TGF- β1诱导的肾成纤维细胞活化

　　曲美替尼是丝裂原激活细胞外信号调控激酶1(MEK1)和MEK2激酶活性的可逆性抑制剂。

　　MEK蛋白是细胞外信号相关激酶(ERK)途径的上游调节因子，能促进细胞增殖。

　　曲美替尼可通过抑制MEK抑制BRAFV600突变阳性癌细胞的生长。

　　接下来，我们通过使用主要的促纤维化细胞因子TGF- β1刺激原代人成纤维细胞，研究了曲美替尼对肾成纤维细胞扩张和信号传导的影响。

　　TGF-β的急性应用β 1导致显著增加mTROC1和ERK1/2途径的激活。曲美替尼(10 nM)在所有测试的时间点都完全抑制ERK1/2激活。

　　同时，在刺激后5分钟，P70S6K和S6的磷酸化分别减弱了88%和75%。在测试的所有其他时间点，曲美替尼还显着减弱了mTORC1途径的激活。

　　相反，曲美替尼不会显着影响Smad2/3的磷酸化，表明对TGF- β无直接干扰1受体信号传导。

　　同样，在存在血清的情况下，曲美替尼在24小时内抑制TGF- β1诱导的ERK1/2和mTORC1活化。用TGF- β1处理后24小时，用20 nM曲美替尼预孵育的成纤维细胞的磷酸化ERK1/2水平降低了58%。在这些细胞中，磷酸-P70S6K和磷酸-S6也分别被分别抑制了67%和91%。

　　与短期刺激相反，曲美替尼还改善了24小时后TGF- β1诱导的Smad2/3磷酸化。TGF- β1显着增加α通过SMA表达1.57倍和trametinib(20 nM)的导致减少51%α SMA表达。

　　另外，曲美替尼剂量依赖性地抑制了TGF诱导的和基底成纤维细胞的增殖，在培养48小时后20nM具有更显着的作用。具体来说，在48小时时，在基础或TGF- β1刺激的条件下，20 nM的曲美替尼使成纤维细胞的扩张分别减少了39%和41%。

　　相当大的α在基础条件下增殖的成纤维细胞中检测到SMA的表达(无TGF- β 1)，这表明在血清的存在下，人成纤维细胞获得的成肌纤维细胞的一些性质。

　　这与使用鼠成纤维细胞的研究一致，尽管如此，TGF- β 1具有累加效应，显著上调α SMA和成纤维细胞增殖增加。