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HCV感染的全基因型限制因子？
为了确定抑制鼠肝中HCV复制的限制因子。为此，我们筛选了由干扰素(IFN)治疗的小鼠肝脏产生的cDNA文库。 该文库包装在包裹慢病毒/ V...
为了确定抑制鼠肝中HCV复制的限制因子。为此，我们筛选了由干扰素(IFN)治疗的小鼠肝脏产生的cDNA文库。
该文库包装在包裹慢病毒/ VSV-糖蛋白的假颗粒中，并转导至n4mBid细胞(S0)，然后用细胞培养衍生的HCV(HCVcc，菌株Jc1)进行两轮选择(S2)。人类n4mBid细胞系是经过基因修饰的Huh-7.5衍生物，具有HCV触发的细胞死亡表型：n4mBid细胞高度允许HCV，但由于NS3-4A蛋白酶介导的修饰Bid蛋白的裂解，HCV复制后会发生凋亡。进行了两轮HCV选择，每轮选择后扩增存活细胞。
对细胞群S0的RNA测序(RNA-seq)分析，即cDNA文库交付后的初始n4mBid细胞群，细胞群S2，连续两次用HCV攻击后的细胞群，显示了1-2%的读图小鼠转录组，代表整合的cDNA文库。这些整合基因中的大多数是蛋白质编码基因座。用Renilla荧光素酶(R-luc)的报告HCV感染(基因型2a，菌株Jc1)显示，与S0相比，S2细胞对HCV的容许性低200倍，而对人冠状病毒R-luc感染的易感性(229E株)仍然不受影响。
为了确定该表型的决定因素，对来自S0和S2细胞群体的人细胞和慢病毒转导的小鼠转录组进行了比较分析。没有明显的已知人类HCV依赖因子耗竭的情况，而观察到代表整合的鼠基因子集的mRNA的富集。十个鼠类基因满足我们的富集标准[S2读数/每千碱基每百万碱基图谱(RPKM)值> 100，−log 10P > 5]，并分别通过慢病毒过表达和随后的感染进行了调查萤火虫荧光素酶(F-luc)报告基因HCV(菌株Jc1)。随后，我们重点介绍了两种最有效的HCV限制器：鼠类Cd302(也称为Dcl-1和Clec13a)和Cr11 [补体成分(3b / 4b)受体1–样。两者均在HCV选择过程中高度富集，并在S2人群中大量表达-此外，它们的异位表达使HCV感染减少了50%以上。
该文库包装在包裹慢病毒/ VSV-糖蛋白的假颗粒中，并转导至n4mBid细胞(S0)，然后用细胞培养衍生的HCV(HCVcc，菌株Jc1)进行两轮选择(S2)。人类n4mBid细胞系是经过基因修饰的Huh-7.5衍生物，具有HCV触发的细胞死亡表型：n4mBid细胞高度允许HCV，但由于NS3-4A蛋白酶介导的修饰Bid蛋白的裂解，HCV复制后会发生凋亡。进行了两轮HCV选择，每轮选择后扩增存活细胞。对细胞群S0的RNA测序(RNA-seq)分析，即cDNA文库交付后的初始n4mBid细胞群，细胞群S2，连续两次用HCV攻击后的细胞群，显示了1-2%的读图小鼠转录组，代表整合的cDNA文库。这些整合基因中的大多数是蛋白质编码基因座。用Renilla荧光素酶(R-luc)的报告HCV感染(基因型2a，菌株Jc1)显示，与S0相比，S2细胞对HCV的容许性低200倍，而对人冠状病毒R-luc感染的易感性(229E株)仍然不受影响。
为了确定该表型的决定因素，对来自S0和S2细胞群体的人细胞和慢病毒转导的小鼠转录组进行了比较分析。没有明显的已知人类HCV依赖因子耗竭的情况，而观察到代表整合的鼠基因子集的mRNA的富集。十个鼠类基因满足我们的富集标准[S2读数/每千碱基每百万碱基图谱(RPKM)值> 100，−log 10P > 5]，并分别通过慢病毒过表达和随后的感染进行了调查萤火虫荧光素酶(F-luc)报告基因HCV(菌株Jc1)。随后，我们重点介绍了两种最有效的HCV限制器：鼠类Cd302(也称为Dcl-1和Clec13a)和Cr11 [补体成分(3b / 4b)受体1–样。两者均在HCV选择过程中高度富集，并在S2人群中大量表达-此外，它们的异位表达使HCV感染减少了50%以上。